术后干眼症

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自体血清滴眼液的制备 [复制链接]

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自体血清(Autologousserum,AS)是指自体静脉血液离体并凝固,除去血浆中的纤维蛋白原后,富含高浓度自体血小板的注射液。

自体血清滴眼液(ASD)可以做为一种非保存的血液标本被生产。它们是天然的、不会引起过敏。血清中包含许多抗菌因子,如:IgG、溶菌酶和补体,有抑制细菌的作用,可以避免附加防腐剂所引起的副作用,这是一般商品制剂所不具备的。

ASD用于治疗眼表疾病最早可追溯到上世纪70年代,Robert等通过移动式眼部灌注泵,将自体血清用于灌注治疗眼部碱烧伤,两例严重烧伤患者的角膜经灌注后均开始保持湿润,眼表缺损愈合。此后直到上世纪90年代,关于自体血清治疗眼表疾病的研究开始广泛进行,且其适用范围十分广泛,如单疱病*性角膜炎,眼化学伤,*斑裂孔等。在干眼症领域,自体血清因其富含的多种生长因子,抗菌因子等与泪液相似性较高的成分,在治疗各种危险因素导致的中重度干眼中发挥了较好的临床疗效。

自体血清滴眼液的制备

关于AS的制备参数和制备后的保存国际上尚无统一标准。Lekhanont等研究发现AS在4℃冷藏箱保存1个月、-20℃冷冻箱保存3个月后其中的维生素A、维生素E、EGF、TGF等的生物活性是稳定的;以体积分数%AS治疗手术引起的角膜上皮损伤是安全和有效的。Jover等也认为体积分数%AS滴眼液不仅可以提供高浓度的生长因子、促进角膜上皮的修复,而且因为省略了稀释这一操作步骤而减少了被污染的风险。目前由于伦理学和患者自身条件的限制,自体/同种异体血清滴眼液还不能作为一种可保存的血液标本被生产而广泛应用于临床;另外,需要反复采血、依从性差也是AS治疗所面临的问题。低体积分数AS可相对减少采血量,提高患者的依从性和顺应性。Pan等回顾了AS治疗眼表疾病的文献:体积分数20%~50%AS滴眼液在临床使用体积分数更为广泛而有效,且体积分数20%AS所含各种因子的浓度更接近于自然人体分泌的泪液;体外研究也显示体积分数12.5%~25.0%的血清更有利于眼表上皮的增殖和移行。这就提示我们今后的临床工作中应首选低浓度的AS滴眼液,在为患者提供有效治疗的同时最大程度地减轻患者的身体和经济负担。

根据文献中报道,较普遍的做法是:在空腹状态下严格无菌操作,从肘静脉抽取患者血液置于无抗凝剂的真空抽血管中(也有人保存促凝管中,个人意见还是用无抗凝剂的管),于25℃恒温箱(或室温)中静置1~2h,~r/min离心5~15min,用无菌注射器将上层血清吸出、注入无菌滴眼液瓶(根据需要用生理盐水或抗生素滴眼液配成不同浓度)备用。

自体血清滴眼液的保存

制备的血清眼液瓶外用不透明纸包裹避光,当天使用的自体血清4°C冰箱保存。暂不使用的自体血清速冻保存,有效期7天。

自体血清滴眼液的稳定性

TsubotaK等研究了保存于4℃和-20℃的血清基本成分(EGF、维生素A、TGF-β)的稳定性。其浓度分别于储存在冷藏箱1周和1个月、冷冻箱1个月和3个月时被测量。结果在4℃冷藏箱保存1个月、-20℃冷冻箱保存3个月,维生素A、EGF和TGF-β仍是稳定的。

国内张志勇等报告,自体血清在-36℃冰柜中保存长达8周,其各种细胞因子及维生素A浓度均无变化。

自体血清滴眼液的安全性

SauerR等使用血液、巧克力、endo、和沙保弱氏琼脂培养基,评定无菌自体血清滴剂在应用前和第4、7天的培养情况。在第1天和第4天检查40个自体血清滴剂,并在第7天检查例样品(40例血清滴剂,40例的瓶顶及40例的瓶底)。检查细菌的琼脂培养基及检查真菌的培养基分别在48小时后、21天后读取。所有患者都接受了至少7天的局部自体血清治疗和预防性抗生素滴剂的治疗。结果:在第1天和第4天自体血清滴剂是无菌的,在第7天40例样本中的3例(7.5%)被表皮葡萄球菌污染。其中2例(5%)合并血清滴剂和瓶顶的污染,第3例(2.5%)为另外的瓶底污染。没有一例显现真菌感染的迹象。在应用自体血清期间和随后阶段,同样没有患者显示任何眼部感染的症状。故他们认为:当滴剂被受过训练的人员应用时,可以确保到第4天不被污染,通过附加预防性抗生素眼液的应用,即使冷藏的非保存自体血清使用到第7天,也同样可以避免感染。

GarciaJimenezV等使用无菌状态下制备的、稀释到20%的患者血清。虽然被患者使用过的血清污染各种各样,但保存在药房里的贮藏器没有一个被污染。他们认为:如果有适当的设备在无菌状态下完成,眼药的制作不会有技术上的问题,贮藏器的污染可能是由于患者的不适当使用引起的。

LagnadoR医院14名住院病人使用的20%自体血清(AS)滴眼液的微生物污染情况。每人第一和最后一滴(总共例样品)在肉汤和血琼脂培养基上培养。结果4名患者(9例样品)仅仅有表皮葡萄球菌生长。1名患者(1例样品)显示有表皮葡萄球菌同时有草绿色链球菌稀疏生长,并且在不同天数这名患者1例样品中有金*色葡萄球菌生长,另1例样品中有表皮葡萄球菌生长。1名患者(1例样品)有微球菌生长。这6名患者均没有发现感染的临床和微生物证据。这项研究显示AS滴剂可以被安全地使用于住院患者,在一项严格的制备和存储协议下,没有细菌污染和随之而来发生感染的重大危险。

国内也有报告,自体血清在-36℃冰柜中保存长达8周,其细菌和真菌培养结果均为阴性,说明长时间保存后的自体血清用于临床仍是安全有效的。

自体血清滴眼液的副作用

自体血清是一种有效、安全的治疗方法,治疗期间很少有副作用的发生,以往的报道中,仅McDonnellPJ等报告1例患者因复发的单纯疱疹病*性角膜炎而行多次角膜移植后发生持续性角膜上皮缺损,给予自体血清每小时滴眼治疗后,发现角膜上免疫球蛋白沉积。患者后来发生了角膜移植物排斥和上皮缺损复发,并再次施行角膜移植术。检查切离的角膜片证明全部角膜上皮缺损,其改变与移植物排斥反应相一致,并且观察到角膜浅基质内相当于“免疫环”的嗜酸性粒状沉着物。免疫过氧化物酶染色IgG、IgM、IgA及κ、λ轻链为阳性。他们认为角膜前泪膜也许是沉积在角膜基质内免疫球蛋白的一种来源。

参考文献:

1.毕娟;卢建群;杜慧斌;汤静.自体血清联合糖皮质激素眼膏治疗非感染性角膜疾病的疗效观察[J].中医眼耳鼻喉杂志,,(01):27-29.

2.曲忻;郝继龙.自体血清在眼表疾病治疗中的价值[J].中国实用眼科杂志,,(10).

3.李燕霞;汪根娥;许淑华.自体血清治疗角膜深层异物剔除的术后疗效观察[J].中国现代医生,,(27)1-84.

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5.车敬斌;田甜;张加宾;袁祥文;赵凤蕾.自体血清联合重组人表皮生长因子对角膜创面的修复作用[J].国际眼科杂志,,(04):-.

6.罗雪澜;蹇文渊.自体血清在干眼症治疗中的应用进展[J].中医眼耳鼻喉杂志,,(01):54-58.

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